四大經(jīng)典核酸純化方法

　　核酸抽提與純化是分子生物學(xué)試驗(yàn)的基礎(chǔ)，核酸純化方法是影響提取核酸質(zhì)量高低的zui重要因素，也是下游分子生物學(xué)試驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。目前常見的核酸純化方法有PC抽提/醇沉淀方法、高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法、離心柱法和生物磁珠法，這幾種方法各有其優(yōu)勢和劣勢。

 

　　一、PC抽提法

 

　　PC抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段，但超過了該飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)不會被一次去除，必須靠多次抽提，方可*去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質(zhì)難以*去除，以及基因組DNA會斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA的特點(diǎn)，在RNA抽提時(shí)獲得DNA殘留極少的RNA。不過有一點(diǎn)要提醒的是，某些植物樣品，在去除某些雜質(zhì)之前，是不能使用PC抽提的，否則核酸必定降解。PC抽提zui大的優(yōu)勢是成本低廉，對實(shí)驗(yàn)條件要求較低，對于經(jīng)費(fèi)緊張的實(shí)驗(yàn)室較為實(shí)用。

 

　　二、高鹽沉淀法

 

　　高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法，同樣也是一個非常不錯的方法。與PC抽提方法相比，除了純度的穩(wěn)定性可能要低一點(diǎn)外，該方法幾乎克服了PC抽提的所有缺點(diǎn)。更快、更輕松的去除蛋白質(zhì)所可以用于大規(guī)模抽提，但其不足之處是純度(蛋白質(zhì)殘留)不夠穩(wěn)定，蛋白質(zhì)的沉淀效率在4℃會更好一些。

 

　　三、離心柱法

 

　　離心柱純化法，是目前試劑盒提取廣泛應(yīng)用的方法。其zui大特點(diǎn)是受人為操作因素影響小，純度的穩(wěn)定性很高(雖然純度不一定比PC純化方法更高)。加入的液體通過離心后會進(jìn)入另外一個離心管中，與含有核酸的柱子*是分開的，所以洗滌更*。其致命弱點(diǎn)是樣品過量，提取效率較低，且需要反復(fù)離心，操作復(fù)雜，成本也較高。

 

　　四、生物磁珠法

 

　　生物磁珠法是將純化介質(zhì)包被在納米級生物磁珠表面，通過介質(zhì)對核酸的吸附，在外加磁場下使核酸附著于磁珠定向移動，從而達(dá)到固液分離純化的作用。與其他幾種方法相比，生物磁珠法具有很多*的優(yōu)勢，如：

 

　　①提取靈敏度高（微量材料即可提取）

 

　　②純化純度高（*與蛋白鹽等雜質(zhì)分離）

 

　　③提取產(chǎn)量高（每mg磁珠能吸附500ugDNA）

 

　　④分離快速（磁分離只需幾秒）

 

　　⑤自動化操作（加液后*機(jī)器自動化操作，無需人力，提率）

 

　　⑥高通量提取（可同時(shí)完成幾十甚至幾百個樣品的提取）

 

　　⑦無毒無害無污染（試劑中不含任何氯仿、酚等，操作環(huán)境更加安全）

 

　　生物磁珠法純化核酸的普及需要磁分離裝置的同步跟進(jìn)，如磁力架或自動提取儀。目前，各類磁分離裝置主要來自于進(jìn)口，不僅價(jià)格較高，而且售后服務(wù)質(zhì)量也偏低。因此，向大家推薦洛陽惠爾納米科技園自主研發(fā)的磁力架、磁力筆及全自動核酸提取儀，該裝置通過技術(shù)創(chuàng)新，大大提高了靈活機(jī)動性，在操作上更加方便快捷，有效解決了磁分離裝置對磁珠法核酸提取的限制，受到科研工作者的*。